Becoming With Schizophyllum Commune: maak een steriele cultuur van gevonden paddenstoelen - Ajarnpa

2024 Auteur: John Day | [email protected]. Laatst gewijzigd: 2024-01-30 11:19

Deze instructable is gericht op het uitleggen hoe je een steriele cultuur van de paddenstoel Schizophyllum Commune (gewone naam Split Gill-paddenstoel) op een petrischaal kunt maken met behulp van gevonden paddenstoelen. Schizophyllum Commune heeft meer dan 28.000 geslachten, is te vinden op alle continenten behalve Antarctica, en heeft het vermogen (net als andere "wit- en bruinrotschimmels") om hormoonverstorende vervuiling (plastics, hormonen die industriële petrochemicaliën nabootsen zoals de meststof Atrazine, de weekmaker Bisfenol-A of het synthetische hormoon Diethylstilbestrol).

Ik zal ingaan op identificatietechnieken voor wilde paddenstoelen, hoe je een voedingsagar-petrischaaltje maakt en hoe je je gevonden paddenstoelen kunt gebruiken om een steriele geïsoleerde cultuur in je petrischaaltje te kweken. Andere instructables in deze serie gaan over technieken zoals genetische identificatie van paddenstoelen, eenvoudige enzymatische tests om het vermogen van de paddenstoel te testen om plastic af te breken en hormoonvervuilende stoffen na te bootsen, en hoe je kaas kunt maken met S. Commune.

Dit project kwam voort uit het samenwerkingswerk van Mary Maggic, Paula Pin en mijzelf tijdens een residentie in HANGAR in Barcelona, Spanje, herfst september 2018. Lees voor meer info over het project op ~~ of sla alle Bla Bla over en ga meteen naar Step 1 voor de tutorial:)

Afbeeldingen zijn afkomstig uit de Schizophyllum Commune Fanzine ~ bestanden kunnen hier gratis worden gedownload

Tijdens de residentie waren onze drie hoofddoelen:

1 ~ Onderzoek en verwerk de wetenschappelijke literatuur over Schizophyllum Commune en de verschillende interacties met hormonen en hormoonverstorende petrochemische verontreinigende stoffen. S. Commune is een van de vele "wit- en bruinrot"-schimmels met het vermogen om hormonale en hormoonverstorende vervuiling af te breken. Deze schimmels voeden zich met bomen door "lignocellulosische" enzymen uit hun netwerklichamen of "mycelia" uit te scheiden en de enzymen zijn in staat om de cellulose en lignine af te breken waaruit bomen zijn gemaakt. Vanwege structurele overeenkomsten tussen cellulose, lignine en EDS'/hormonen zoals atrazine, BPA, estradiol, diethylstilbestrol en nonylfenolen, kunnen de "lignocellulosische" enzymen die door de schimmels worden uitgescheiden, ook een grote verscheidenheid aan toxische stoffen afbreken. Daarnaast produceert S. Commune immunostimulerende polysachariden die nuttig zijn als kankerpreventie en -behandeling (goedgekeurd in Japan voor de behandeling van baarmoederhalskanker), de fyto-oestrogene eigenschappen van bepaalde planten kunnen verbeteren door middel van fermentatie, kunnen worden gebruikt in plaats van stremsel en lactobacilius in kaasbereidingsprocessen en produceren trombineklonter oplossende enzymen (nuttig bij de behandeling van trombose). Vreemd genoeg worden dezelfde "bèta-glucanen" die met kokend water kunnen worden geëxtraheerd als kankerbehandelingen en immunostimulantia, ook door de aardolie-industrie gebruikt om de olieopbrengsten te verhogen, waardoor S. Commune in een bizar terugkoppelingscircuit terechtkomt bij de productie van het hormoonontregelende petrochemicaliën is het in staat om te degraderen en te saneren.

2 ~ Ontwikkel doe-het-zelf- en DIWO-protocollen (doe het met anderen) die deze recepten vereenvoudigen voor het werken met EDC's en schimmels om gecodificeerde wetenschappelijke kennis te vertalen in een taal die toegankelijker is. Gebruik deze recepten voor educatie, voor ondervraging, voor weerstand tegen moleculaire kolonisaties en voor het creëren van nieuwe verhalen over het ontstaan van meerdere soorten en onze collectieve mutagenese.

3 ~ Daag het dominante cisheteronormatieve, queerfobe discours rond hormoonontregelende chemicaliën (EDC's) uit. Om Malin Ah-King en Eva Hayward's wetenschap over de kwestie te citeren: "Veel nieuwsuitzendingen rapporteren deze angstaanjagende endocriene verhalen uit onze achtertuin. In een poging om deze problemen op de voorgrond te plaatsen - zoals we in de volgende zullen beschrijven - heeft de media een Frankenstein-metamorfose onder de aandacht gebracht die seks en seksualiteit bedreigt. In plaats van de vele andere gezondheidsrisico's die samenhangen met blootstelling aan giftige stoffen aan te pakken, staan de meest sensationele en polemische kwesties in voor debat en kritische reacties. Het roept vragen op: waarom staat seks meer centraal dan kanker, auto-immuunziekte, en zelfs de dood? Welke culturele zenuwen (waarvan vele geglobaliseerd) worden geactiveerd? En, voor degenen onder ons met feministische zorgen, hoe kunnen we het debat heroriënteren weg van essentialisme, seksisme en heteronormativiteit?" (giftige geslachten).

Schizophyllum Commune is een unieke "witrotschimmels" in die zin dat er meer dan 28.000 genetische geslachten zijn gevonden. Deze aanpassing, zo denken velen, heeft de ongelooflijke genetische diversiteit van deze soort mogelijk gemaakt die op elk continent over de hele wereld bestaat, behalve Antarctica. We wilden de prachtige seksuele veelvoud van dit organisme vieren als een voorbeeld van de vreemdheid van de biologie. Het dominante discours rond EDC's in de media, en zelfs van milieuactivisten, richt zich sterk op onwetenschappelijke verhalen, dat deze moleculen bepaalde seksualiteiten of geslachten veroorzaken die onze samenleving pathologiseert, niet-normatief bestempelt en vaak probeert te elimineren of te vermijden. Niet alleen is de sex-paniek, queer-fobische focus van publieke verontwaardiging over EDC's wetenschappelijk onrealistisch (hormonen en hormoonontregelaars maken mensen niet queer of trans), maar het negeert alle verwoestende reële effecten die we kunnen koppelen aan EDC's: obesitas, schildklieraandoeningen, bepaalde vormen van kanker, naast andere gezondheidsrisico's.

Stap 1: Vind Schizophyllum Commune Wonen in uw gemeenschap

Steriele kweken van laboratoriumkwaliteit van Schizophyllum Commune kunnen voor ongeveer $ 350 worden gekocht bij een microbiologische kweekbank zoals ATCC … daarom hebben we ervoor gekozen om gratis te kweken van wilde paddenstoelen:)

Ik had het gemakkelijk omdat ik over Schizophyllum Commune had gelezen en toevallig zag dat het op een dag aan een boom voor mijn appartement groeide. Als je niet zoveel geluk hebt om per ongeluk S. Commune in je buurt tegen te komen, wil je naar een bosrijk gebied gaan om te zoeken naar "beugel"-paddenstoelen die groeien op ziekelijke hardhoutbomen (bomen die eruit zien alsof ze niet te goed) of omgevallen bomen. S. Commune is een van de meest voorkomende bestaande schimmels over de hele wereld en kan vrijwel overal worden gevonden waar hardhout kan groeien.

Mushroomobserver.org biedt een geweldige gedetailleerde beschrijving van waar en wanneer u S. Commune waarschijnlijk zult vinden, evenals hoe u het kunt identificeren en hoe u "look-alikes" kunt vermijden die tot verkeerde identificatie kunnen leiden:

"IDENTIFICATIE: Schizophyllum commune is gemakkelijk te herkennen aan zijn gespleten kieuwen, dichte haren en waaiervormige hoed. De hoed is 1-4,5 cm breed en heeft meestal een schelp- of waaiervorm met een grijs tot witachtig oppervlak. Basidiosporen zijn 5-7,5 × 2 -3 micrometer Een vergelijkbare paddenstoel die bekend staat als de "Crimed Gill" Plicaturopsis crispa is niet zo wijd verspreid.

HABITAT: Schizophyllum commune groeit op hardhout met behulp van enzymen om lignine af te breken en veroorzaakt "witrot". Het is dus te vinden in bijna alle bosrijke gebieden. Het kan het hele jaar door worden gevonden vanwege zijn vermogen om uit te drogen, te rehydrateren in betere omstandigheden en vervolgens te blijven sporuleren.

Deze schimmel kan parasiteren op bomen met een kleine diameter die onder stress staan door andere factoren, zoals droogte.

KIJK OOK OP: Plicaturopsis crispa of de "Crimed Gill" is vergelijkbaar met de Split Gill. Het heeft ook een schelp/waaiervormig vruchtlichaam. De dop is echter roodbruin of geelbruin en de onderkant is zeer onderscheidend. Het heeft gekrompen aderachtige kieuwen die heel anders zijn dan de gespleten kieuwen van Schizophyllum commune. De gekrompen kieuw komt minder vaak voor, maar is onderscheidend als hij wordt gevonden."

Stap 2: Maak nutriëntagarplaten voor S. Commune om op te groeien

Om een cultuur van de S. Commune te isoleren, heb je wat petrischalen nodig die gevuld zijn met voedsel voor de paddenstoel. Moutextract Agar is een eenvoudig te maken voedsel voor S. Commune, of "voedingsmedia" dat kan worden gemaakt met gemakkelijk toegankelijke ingrediënten. Het is ook een goede voedselbron om te gebruiken bij het uitvoeren van enzymatische assay-experimenten met S. Commune en andere wit- of bruinrotschimmels ~~ dit proces wordt behandeld in een andere instructable.

OPMERKING: Als u problemen had met het vinden van S. Commune, zijn er veel andere schimmels in dezelfde familie die met dezelfde processen kunnen worden gekweekt en die net zo goed, zo niet beter zijn in het afbreken van hormoonontregelende verontreinigende stoffen. Kalkoenstaart (Trametes Versicolor) is gevonden in veel onderzoeken waarin werd gekeken naar honderden wit- en bruinrotschimmels als de grootste producenten van de "lignocellulosische" enzymen die petrochemische vervuiling afbreken. Ook oesterzwammen zijn hier erg goed in.

Ik doe mijn microbiologische werk in een gemeenschapsbiologielab genaamd BUGSS (Baltimore Underground Science Space) waar ik toegang heb tot glaswerk, digitale weegschalen, gegradueerde cilinders, een autoclaaf (voor hitte- en druksterilisatie van de media), enz. Labs zoals deze hebben is de afgelopen tien jaar over de hele wereld ontstaan, dus misschien wilt u deze lijst controleren om te zien of er een bij u in de buurt is. Als je niet zo'n geweldig gemeenschapslab in je omgeving hebt, moet je investeren in basisapparatuur voor dit proces, zoals:

1 ~ Een digitale weegschaal om je ingrediënten precies af te meten

2 ~ Een snelkookpan om je media te steriliseren met hitte en stoom

3 ~ Petrischalen, kunnen vrij goedkoop online worden gekocht, herbruikbaar glas of wegwerpplastic zal werken, maar herbruikbaar is altijd beter:)

4 ~ Wat glaswerk om je ingrediënten in te mengen, te steriliseren en in te bewaren.

Als je niet in die apparatuur wilt investeren, kun je voorgegoten moutextract-agarplaten vinden om te kopen op websites zoals Amazon ~ het zal op de lange termijn alleen maar duurder zijn als je van plan bent microbiologisch werk te blijven doen.

Er zijn al veel geweldige handleidingen en youtube-video's over hoe je thuis je eigen petrischaaltjes met voedingsbodem kunt maken. Dus in plaats van hier uitgebreid op in te gaan, zal ik er een paar linken -- en het recept geven voor 2% moutextract-agar, de voedingsbodem die je gaat gebruiken.

Freshcap-paddestoelen: gids voor het maken van agarplaten voor het thuis kweken van champignons

Mykoweb: Aan de slag met champignonteelt

Technisch gegevensblad moutextract-agar

2% Mout Extract Agar (MEA) ~~ Recept voor 1 Liter:

20 g moutextract (gewone voorraad voor het maken van bier, kan online worden gekocht)

15 g agar (stollingsmiddel - dit wordt vaak gebruikt om mee te koken, zodat het online of bij sommige supermarkten kan worden gekocht)

1 liter H20 (ik gebruik meestal water met omgekeerde osmose dat bij de meeste supermarkten in gallonkannen kan worden gekocht)

Dit recept is eenvoudig aan te passen als je kleinere hoeveelheden wilt maken. Ik maak bijvoorbeeld vaak maar 250 ml per keer, dus ik gebruik uiteindelijk maar 5 gram moutextract, 3,75 gram agar en 250 ml water.

Stap 3: Innoculeer je petrischaaltje met schimmels

De paddenstoel die je ziet, wordt het "vruchtlichaam" genoemd, het is slechts een klein deel van het organisme. Het grootste deel van zijn lichaam is verborgen in de boom (of in de grond) en verbruikt het hout. Dit deel van de paddenstoel wordt het mycelium genoemd. Om het witte draadvormige, tentaculaire, rhizomatische, myceliumlichaam van Schizophyllum Commune op een petrischaal te kweken, neemt u een monster van de stengel, steriliseert en plaatst u op uw MEA-platen. Mycelium zal uit het gesteriliseerde kernmonster van de paddenstoelstam groeien en de petrischaal koloniseren, eruitziend als een witte donzige mat.

Je hebt nodig:

• De Malt Extract Agar (MEA)-platen die u in de vorige stap hebt voorbereid
• 70% isopropylalcohol (ontsmettingsalcohol) en een spuitfles
• Papieren handdoeken
• Scalpel, of gewoon een roestvrijstalen scheermes - een stanleymes zal werken
• metalen pincet
• handschoenen
• Een vlam -- Ik gebruik een alcoholische lamp voor het steriliseren van instrumenten, NonDisjunction heeft hier een geweldige tutorial over hoe je er een kunt maken.
• Steriel oppervlak om op te snijden (ik heb hiervoor zojuist een steriele petrischaal gebruikt)
• Parafilm, een paraffinefilm die wordt gebruikt om petrischalen af te sluiten - je kunt ook gewoon plakband gebruiken als je dit niet hebt

STERIELE TECHNIEK:

Het belangrijkste waar u rekening mee moet houden bij het gebruik van steriele technieken, is dat bacteriën en sporen continu in de lucht vallen, dus u wilt uw petrischaaltjes zoveel mogelijk afgedekt houden. Als je de deksels optilt om media te schenken of te enten, is het altijd het beste om het deksel net boven de schaal te houden, zodat je horizontaal toegang hebt tot de binnenkant, maar het deksel boven de schaal te houden om te voorkomen dat bacteriën erin vallen. zijn een gigantisch conglomeraat van menselijke, bacteriële, schimmel- en andere organismen ~~ hoewel je het niet kunt zien, wordt je omringd door een dichte wolk van microben die zich van je lichaam verspreiden. In plaats van alleen op het oppervlak van je huid te zitten, strekt je microbioom zich uit in de lucht ~~ sooooooo, zwaai nooit met je handen over de petrischaal, of leun nooit over de open schaal om erin te kijken. En draag handschoenen als Je hebt ze;)

STEL UW SEMI-STERIELE WERKRUIMTE IN

Kies een niet-poreus werkoppervlak dat vrij is van vuil en rommel. Spuit het gebied af met uw 70% isopropylalcoholoplossing en veeg het af met een papieren handdoek. Plaats je vlam in het midden van je werkgebied en steek hem aan. Je wilt zo dicht mogelijk bij de vlam werken, omdat er een klein steriel veld omheen ontstaat. Leg je MEA-platen aan de ene kant en je paddenstoelenmonster aan de andere kant op een steriel snijvlak. Ik gebruik normaal gesproken een steriele petrischaal als mijn steriel snijvlak en als gereedschapssteun. Giet wat isopropylalcohol in een klein glas - je gebruikt dit om je mes en pincet te steriliseren terwijl je werkt.

*¡~ INOCULEREN ~!*

Voordat je iets doet, steriliseer je je mes en pincet door ze in de isopropylalcohol te dopen en ze een tijdje boven de vlam te houden. Leg ze na sterilisatie op uw steriele snijvlak als u ze neerlegt. Houd met het pincet de stengel van de paddenstoel stil en snijd een stuk van het uiteinde af. Neem dit stuk en snijd alle zijkanten door zodat je een klein blokje champignonstamkern krijgt waarvan alle buitenste oppervlakken zijn verwijderd. Dit helpt bij het verwijderen van alle andere microben die op de paddenstoel leven, zodat ze je cultuur niet besmetten. Dompel vervolgens de steelkern ongeveer 30 seconden in de isopropyl, trek hem eruit en laat hem drogen in het steriele veld van de vlam (gebruik de vlam niet om hem te drogen, dit zal de paddenstoel doden). Vlam steriliseer je pincet opnieuw terwijl je wacht tot de steelkern droog is. Til vervolgens het deksel van een van je MEA-platen net genoeg op om het pincet vanaf de zijkant naar binnen te schuiven en gebruik het gesteriliseerde pincet om de steelkern in het midden van de plaat te plaatsen. Sluit de plaat af met parafilm en de komende weken zou je S. Commune-mycelium de plaat moeten zien koloniseren.

Ik maak meestal meerdere platen wanneer ik met wilde monsters werk, zodat als ik besmetting krijg, ik meer kans heb om ten minste één schone cultuur te hebben.